在疑似原发性或转变性核心神经系统（CNS）恶性肿瘤患者中澳门六合彩，脑脊液（CSF）细胞病理学分析局限于检测肿瘤。本接头探索了使用 CSF 液体活检（LBx）检测 CNS 的肿瘤经由。使用 302 基因panel对疑似转变性（N = 106）或原发性 CNS（N = 23）肿瘤患者的CSF游离 DNA（cfDNA）进行深度测序。4 份样本（3%）（3 份转变性和 1 份原发性）未通过测序质控尺度。在103例疑似转变性肿瘤患者中，84例（82%）证实转变性肿瘤。在22例疑似CNS肿瘤患者中，11例（50%）证实原发性CNS肿瘤。55 份样本（54%）检测到染色体非常。23 例（22%）转变性肿瘤患者和 1 例（5%）原发性 CNS 肿瘤患者检测到胚系突变。在 29 例转变性乳腺癌患者中，2 例（7%）有 ESR1 突变，9 例（31%）有 PIK3CA 突变。在 21 例转变性肺癌患者中，9 例（43%）有 EGFR 突变，5 例（24%）有 KRAS 突变。在 14 例患者中比较了 CSF LBx 与外周血 LBx，13 例（93%）仅流露 CHIP，1 例患者流露 CNS 原发性肿瘤突变。14 例患者的相连样本标明，CSF LBx 可用于监测调理服从。本接头标明，CSF LBx 在临床上是可靠的，在很大一部分转变性 CNS 肿瘤患者中提供了有价值的收尾，在原发性 CNS 肿瘤患者中，在较小进程上亦然如斯。

张开剩余91%

接头配景

疑似原发性或转变性核心神经系统（CNS）恶性肿瘤患者同样分析脑脊液（CSF）评估是否存在肿瘤。惯例措施的细胞学查抄同样是不充分的，因为CSF样本中肿瘤细胞较少。从 CSF 样本中取得的细胞数目有限，这也浪漫了进行额外检测评估免疫表型、染色体非常和基因变异的能力。对于评估血液系统恶性肿瘤累及 CNS 的情况，染色体流式细胞术和细胞遗传学数据对于会诊和细目调理至关要害。对于原发性和转变性实体瘤，基因组非常的分子评估对于靶向调理和评估耐药机制也很要害。可是，在大无数累及 CNS 的癌症类型中，尤其是实体瘤，在 CSF 中很少能够找到鼓胀的轮回肿瘤细胞。此外，即使通过显微镜查抄识别了肿瘤细胞，平常数目也过少，难以进行补助查抄来识别特定的生物学特征，细目精确调理措施。

与正常细胞比较，肿瘤细胞更新换代的速率更快，零散 DNA 和 RNA 的速率更快。由于这些特质，在一些器官中，外周血游离 DNA（cfDNA）和 RNA（cfRNA）已被庸碌用于评估转变性和局限性肿瘤。可是，由于血脑障蔽，在外周血中很少检测到来自 CNS 肿瘤的 cfDNA。检测 CSF 中的 cfDNA 或 cfRNA 或者能为检测 CNS 内的肿瘤经由提供一种更可靠的措施。

为此，咱们从疑似原发性或转变性肿瘤累及 CNS 的患者中网罗 CSF，分析 cfDNA 和 cfRNA。

接头收尾

在接头时期，检测了来自疑似转变性（#105）或原发性（#23）CNS 肿瘤患者的 129 份 CSF 样本。中位患者年事为 58 岁（领域：19 至 86）。在这 129 份 CSF 样本中，4 份因 cfDNA 测序数据不适宜质地尺度而被排斥：3 份来自疑似转变性 CNS 肿瘤患者，1 份来自疑似原发性 CNS 肿瘤患者。除了一份样原本自一例被会诊为乳腺癌的患者外，其余所有这个词检测样本在惯例细胞学检测中均未流露会诊收尾。在 14 例患者中，还网罗了外周血（PB），并使用调换的时候和调换的措施检测 cfDNA 和 cfRNA。此外，14 例患者网罗和检测了两份或以上相连样本。在 92% 的样本中，cfRNA 数据莫得达到咱们的质控（达到 8000 万reads和大于 20% 的剪接read）。

转变性肿瘤的阳性率高于原发性CNS肿瘤

在来自疑似转变性肿瘤患者的 103 份 CSF 样本中，84 份（82%）流露常见于实体瘤或淋巴瘤的突变或染色体非常，证实了 CNS 转变的会诊（表 1）。在会诊为乳腺癌（91%）、肺癌（95%）或淋巴瘤（71%）的患者的CSF样本中，许多检测到此类非常。比较之下，仅在 11 例（50%）（P 值 = 0.004，Kruskal-Wallis 磨练）疑似原发性 CNS 肿瘤患者样本中识别原发性 CNS 肿瘤（表 1）。与侵袭性较低的肿瘤比较，胶质母细胞瘤流露出更高的阳性率（表 1）。在 CSF 中识别实体瘤的存在并不可永别软脑膜疾病和脑骨子肿瘤。

表1

CSF检测到染色体非常

在转变性肿瘤患者的 103 份样本中，55 份（54%）检测到染色体结构非常，而在 23 份原发性 CNS 肿瘤患者样本中，唯有 4 份（18%）检测到（表2；图 1、图 2）。唯有 1 例转变性肿瘤流露染色体非常，无体细胞突变。该病例流露 5q 加多，触及 PDGRB，16q 缺失，可能是由于 PDGFRB 扩增以及可能的 16q 纯合缺失。一些检测到的非常与调理稀奇关系。20 份样本流露一个或多个调理关系基因扩增，包括 PDGFRB、ERBB2、CCND1、MDM2、FGFR1、MYC、KRAS 等（表 2；图 1）。如表 3 所示，比较团结时候网罗的 CNS 与外周血样本发现，所有这个词外周血样本均未检测到染色体非常。

表2（附近滑动检察更多）

图1

图2

表3

染色体非常的存在与否与会诊和预后关系。举例，表 4 流露了具有单个非常（12 三体）的淋巴瘤患者（患者 #2）达到缓解并在 406 天后保执缓解，而具有多个染色体非常（复杂非常）的患者 8 在 285 天内复发。

表4（附近滑动检察更多）

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CSF突变谱

检测到的突变因肿瘤类型而异。可是，21/125 份样本（17%）流露 ASXL1、TET2 和 DNMT3A 突变，可能代表 CHIP（潜能不决的克隆性造血）。其中 2 例严格流露 CHIP，无其他非常，被以为转变性或原发性 CNS 肿瘤的分子凭证为阴性。比较 PB 与 CSF，13/14 的比较样本流露 PB 突变水平低，主要为 CHIP 或胚系。1 例弥散性中线胶质瘤患者 PB 和 CSF 均流露 H3-3A（H3K27M）突变。可是，CSF 的突变水平权贵高于 PB（变异品貌 36% vs 0.001%）。更要害的是，所有这个词 PB 样本均未流露染色体非常，而 8/14 的病例 CSF 流露权贵的染色体非常。

在 125 例提供信息的病例中，24 例（19%）检测到高品貌（VAF）（40%–50%）突变，教唆胚系突变。其中，2 例检测到 BRCA1 突变，3 例BRCA2，3 例PRKDC，5 例CHEK2，2 例FANCC，2 例PALB2，1 例ALK，1 例BARD1，1 例TP53，1 例PTEN，1 例MSH2，1 例MPL，1 例SRC。这些胚系突变大多触及 DNA 诞生，导致同源重组劣势（HRD）。当分析样本的肿瘤分数权贵较高时，永别胚系突变与体细胞突变可能很不毛。可是，在大无数液体活检样本中，肿瘤分数稀奇低，胚系突变的 VAF唯有当胚系突变和多样体细胞突变之间存在权贵相反时才判定。

在 29 例阳性收尾的乳腺癌转变性肿瘤中，2 例（7%）有 ESR1 突变，9 例（31%）有 PIK3CA 突变。在 21 例阳性肺癌病例中，9 例（43%）有 EGFR 突变，5 例（24%）有 KRAS 突变。

CSF液体活检的临床关系性

CSF 流露存在癌症关系分子非常可看成癌症累及 CNS 的证实性检测，这些发现也与调理和监测关系。在 CSF 中不错检测到耐药关系突变以及新的可操作突变。表 4 展示了使用 CSF 液体活检进行患者监测的示例。前 4 例患者在调理后从阳性转为阴性，而患者 8 发扬出低水平突变，教唆可能的淋巴瘤，但在随后的检测中转为较着的弥散性大 B 细胞淋巴瘤。非常水平以每 1 mL CSF 的分子水牢固量汇报（数据未流露），该水平不错定量监测。诚然莫得永劫候的随访，但从有限的数据来看，转为阴性 CSF 可能与较好的结局关系。举例，表 4 中患者 #2 在 406 天后仍处于 CR 情状，教唆较好的无进展生计期和可能的总生计期。

讨 论

CSF 提供了不同于外周血浆的特殊环境。CSF 包含的细胞、卵白质和糖水平较着较低。此外，CSF 和外周血浆之间的卵白质图谱以及对千般肿瘤或炎症经由的反应身分也存在相反。CSF 特异性富含 T 细胞。因此，CSF 平常不可为细胞存活和惯例细胞学查抄提供细腻的环境，在存在 CNS 转变的情况下，CFS 细胞学评估同样不细目或阴性。CSF cfDNA 和 cfRNA 下一代测序可能是一个很好的替代措施。更要害的是，对分子非常的基因组分析可能提供对于靶向调理或预测对特定调理耐药性的信息。

本接头收尾标明，CSF cfDNA 测序是评估转变性肿瘤累及 CNS 的可靠措施。可是，咱们评估 cfRNA 的尝试标明，在大无数情况下，cfRNA 降解，无法可靠地用于分子评估或定量。与外周血不同，cfRNA 检出水平稀奇低，尽管 cfDNA 很容易检出且水平相对较高。对低水平 cfRNA 进行测序会导致高抒发基因（平常为管家基因）的 RNA 水平偏倚，而参与肿瘤发生经由的要害基因未被检测到（零水平）。本接头标明，在转变性肿瘤患者中，使用 cfDNA 时，82% 的CSF样本流露临床有效的信息。所接头的转变性肿瘤包括实体瘤和淋巴瘤（表1）。乳腺癌最常见，其次是肺癌；在这些癌症中，液体活检识别肿瘤的比例分别为 91% 和 95%。高比例（68%）的淋巴瘤（DLBCL 和其他类型）的 CSF 液体活检也呈阳性。

更要害的是，液体活检收尾平常在调理遴荐方面具有临床关系性。举例，31% 的乳腺癌流露 PIK3CA 突变，教唆不错被 PI3K 扼制剂靶向；9% 流露 ESR1 突变，教唆氟维司群和 CDK4/6 靶向调理可能有意。在肺癌病例中，43% 流露不错靶向的 EGFR 突变，24% 流露 KRAS 突变。这些发现维持佩戴EGFR和KRAS突变的肺癌更倾向于累及CNS。此外，CSF 液体活检可用于监测患者和评估调理服从。表 4 的数据具有临床价值，可匡助大夫制定个体化精确调理。

咱们的检测panel包括大无数已知与遗传性癌症关系的基因。要是它们不参与癌症，应通过检测皮肤活检或外周单核细胞样原本证实是否存在胚系突变，奉告主治医师可能存在胚系突变稀奇要害。当变异品貌（VAF）在 40% 到 50% 之间时，瞻望为胚系突变，当 VAF 权贵较低时，则怀疑为其他突变。意旨的是，在这一系列患者中，在 22% 的转变性肿瘤患者样本中检测到胚系突变，权贵高于所有这个词类型癌症的预期比例（6% 至 10%）。有接头标明，癌症易感基因胚系突变的患者可能有较高的 CNS 受累倾向，这可能反应了转变至 CNS 倾向更高的癌症类型。本接头中高比例的转变性肿瘤患者患有乳腺癌，胚系突变在乳腺癌的肿瘤发生中起要害作用，这也许是咱们病例中胚系突变率高的原因。

CSF 还检测到权贵的染色体加多和缺失，这不仅与临床会诊关系，还与调理措施关系。高出一半（54%）的转变性肿瘤患者 CSF 检测到染色体加多或缺失。一份来自一例转变性乳腺癌患者的样本流露染色体改变，莫得单个基因点突变。比较单基因突变，乳腺癌的肿瘤发生更可能由染色体结构非常启动。识别此类非常对于会诊和调理遴荐齐很要害。举例，检测到 ERBB2、CCND1、MDM2 和 FGFR1 基因扩增与靶向这些基因的调理遴荐计划。

尽管本接头样本量较小，但咱们的数据标明，原发性 CNS 肿瘤不错使用 CSF 识别，尽管与转变性肿瘤比较，检出率要低得多（原发性 55% vs 转变性 82%）（表 1）。在触及疑似原发性 CNS 肿瘤的 22 例提供信息的病例中，11 例流露肿瘤凭证，4 例流露与分类和预后关系的染色体结构非常。唯有一例样本提供信息的患者流露胚系突变，发生于CHEK2。

基于 CSF 分子发现作念出调理方案是新的临床执行，应严慎履行。调理方案应试虑全体临床发扬和病史。在评估 CSF 分子发刻下，应排斥 CHIP。如表 3 所示，在 CSF 中平常也不错检测到一些 CHIP 突变，但当肿瘤累及 CNS 时，实体瘤非常平常占主导地位。将 CSF 收尾与 PB 收尾进行比较可能是一种很好的尺度作念法。此外，确保 CSF 收尾与预期的原发肿瘤收尾一致稀奇要害。

总之，在转变性肿瘤患者中，CSF 液体活检对于评估 CNS 受累是可靠的，在原发性脑肿瘤患者中，在较小进程上亦然如斯。咱们的论断受到病例数目相对较少的浪漫，需要进一步的接头将 CSF 分子发现与结局关系联。

参考文件：

Ahmad Charifa, Sally Agersborg, Arash Mohtashamian, Andrew Ip, Andre Goy, Maher Albitar, Liquid biopsy for evaluating mutations and chromosomal aberrations in cerebrospinal fluid from patients with primary or metastatic CNS tumors, The Journal of Liquid Biopsy, Volume 6澳门六合彩, 2024, 100281, ISSN 2950-1954, https://doi.org/10.1016/j.jlb.2024.100281.

发布于：江苏省

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